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박테리아 아밀라아제는 질 미생물군집에 의한 글리코겐 분해를 가능하게 합니다.

Nov 22, 2023Nov 22, 2023

자연 미생물학 8권, 1641~1652페이지(2023)이 기사 인용

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인간의 질 미생물군은 유산균에 의해 지배되는 경우가 많으며 보다 다양한 혐기성 미생물 군집으로의 전환은 건강 위험과 관련이 있습니다. 용해된 상피 세포에서 방출되는 글리코겐은 질 내 중요한 영양 공급원으로 여겨집니다. 그러나 질 박테리아가 글리코겐을 대사하는 메커니즘은 불분명하며 박테리아와 인간 효소가 모두 관련되어 있다는 증거가 있습니다. 여기서 우리는 글리코겐에서 아밀라아제가 결핍된 락토바실러스 크리스파투스(Lactobacillus 크리스파투스)의 성장을 지원하는 질 박테리아의 풀라나제(PulA 동족체)인 6개의 글리코겐 분해 효소(GDE)를 생화학적으로 특성화합니다. 우리는 pH 내성, 기질 선호도, 분해 생성물 및 억제 민감성의 변화를 밝힙니다. 질 미생물군집 데이터세트 분석에 따르면 이러한 효소는 모든 지역사회 상태 유형에서 발현됩니다. 마지막으로, 우리는 자궁경부질액에서 박테리아 및 인간 GDE의 존재와 활성을 확인합니다. 이 연구는 박테리아 GDE가 글리코겐 분해에 참여할 수 있음을 입증하여 질 미생물군을 형성할 수 있는 대사에 대한 통찰력을 제공합니다.

인간의 질 미생물총 내 세균 불균형은 건강에 좋지 않은 결과와 관련이 있습니다1. 박테리아 공동체 구성은 분류학적으로 다섯 가지 공동체 상태 유형(CST) 중 하나로 분류될 수 있습니다. CST I~III 및 V는 단일 종의 Lactobacillus인 L. 크리스파투스, L. gasseri, L. 이너스 및 L. jensenii가 각각 지배적입니다. 대조적으로, CST IV는 Gardnerella, Prevotella, Mobiluncus 종 및 낮은 수준의 Lactobacillus 종을 포함하여 다양한 혐기성 및 조건 혐기성 미생물 그룹으로 구성됩니다. 락토바실러스가 우세한 CST는 4.5 미만의 질 pH, 낮은 Nugent 점수 및 염증 감소3와 관련이 있는 반면, CST IV는 더 높은 pH와 HIV 감염4, 세균성 질염5 및 조산을 포함한 여러 가지 건강 후유증과 관련이 있습니다6. 그러나 CST IV는 건강한 히스패닉 및 흑인 여성에서 과도하게 나타나며 반드시 세균불균형을 나타내는 것은 아니라는 점에 유의하는 것이 중요합니다7. 전반적으로, 질 미생물군 구성만으로는 건강 결과를 예측하기에는 불충분하며 이 공동체에 대한 기계적인 이해를 얻으려면 질 박테리아 기능을 해독해야 한다는 것이 분명해졌습니다1.

숙주 관련 박테리아 군집의 구성과 안정성에 영향을 미치는 것으로 알려진 기능 중 하나는 글리코시드 가수분해효소에 의한 식이 또는 숙주 유래 공급원으로부터 탄수화물을 유리시키는 것입니다. 이는 인간 장내 미생물군 내에서 잘 확립되어 있지만8,9,10,11 질 환경에서의 탄수화물 대사는 잘 알려져 있지 않습니다. 질 샘플의 글리코겐 수준은 락토바실러스 우세 및 낮은 질 pH와 연관되어 있기 때문에 박리되고 용해된 상피 세포에서 방출된 글리코겐은 질 유산균의 집락화를 지원한다고 널리 알려져 있습니다. 그러나 최근까지 글리코겐에서 성장할 수 있는 질내 락토바실러스 분리물을 얻으려는 시도는 대체로 실패했으며15,16 질 박테리아가 이 탄소원에 접근하는지 여부와 방법에 대한 의문이 제기되었습니다.

글리코겐은 주기적인 α-1,6-글리코시드 가지를 갖는 α-1,4-글리코시드 결합 포도당 단위의 선형 사슬로 구성됩니다. 글리코겐의 대사에는 더 짧은 포도당 중합체(말토덱스트린)를 방출하기 위해 세포외 글리코시드 가수분해효소가 필요합니다. 여러 질 유산균은 성장을 위해 말토덱스트린을 사용하므로 질 환경의 비유산균 글리코시드 가수분해효소가 이러한 올리고당을 방출한다는 초기 가설로 이어집니다17. 자궁경부세척액 샘플(CVL)에서 인간 α-아밀라아제의 검출은 이 제안을 뒷받침할 수 있습니다17,18. 그러나 췌장과 타액선17에서 주로 생산되는 인간 아밀라아제가 생식기액에서 어떻게 발견되는지는 아직 확립되지 않았습니다.

20% of CST III metagenomes. However, the detection of these genes in the metatranscriptomes was highly variable (6.45%–38.7%)./p>0 genes per bacterial genome. A multiple comparisons (Dunnett) one-way ANOVA was performed to determine statistically significant differences compared to CST I abundance (CST IV, ****P < 0.0001; CST V, *P = 0.0196; NSP > 0.05,) The box represents 1.5× the interquartile range and the whiskers represent the minimum to the maximum of the dataset. The centerline denotes the median. b, Heat map of metagenomic presence and abundance detected using ShortBRED within each sample. NP, not present. c, ABPP analysis identifies bacterial GDEs and human proteins (α-amylase and GAA) in CVF supernatants. ND, not detected; GAA, lysosomal α-glucosidase. d, Human CVF contains distinctly bacterial pullulanase activity at pH 5.5. Data are representative of three experimental replicates over 2 d and the error bars are one standard deviation above and below the mean. A multiple comparisons (Dunnett) one-way ANOVA was performed to determine statistically significant differences compared to the no-CVF sample (blue) (S003, ****P < 0.0001; S011, ****P < 0.0001)./p>35% amino acid identity from microbes associated with health or disease were selected. Genomic DNA was extracted from the encoding strains with a DNeasy UltraClean microbial kit (Qiagen). Genes were amplified via PCR removing the signal peptide (Supplementary Fig. 1) and cloned into the E. coli expression vector pET28a (Novagen) via Gibson assembly to generate an N-terminal His6-tagged gene. Plasmids were then transformed into the expression host BL21 (DE3) (P. bivia enzymes) or ArcticExpress (DE3) (all other enzymes) for expression and purification. Complete lists of plasmids and primers are provided in Supplementary Table 2 and Supplementary File 1, respectively./p>0) by the total number of samples with the corresponding CST./p>0.95 (corresponding to ~2% FDR) were searched for CAZyme domains using dbCAN 2 (ref. 68)./p>

0). The sample size is as follows: CST I, n = 39; CST II, n = 16; CST III, n = 31; CST IV, n = 83; CST V, n = 9./p>